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蛋白穩(wěn)定性分析儀得到的曲線圖我們該如何分析？
點擊次數(shù)：387 更新時間：2025-08-19
蛋白穩(wěn)定性分析儀要在把蛋白放在逐漸升溫的環(huán)境里，實時看它什么時候開始“散架”。儀器會輸出一條曲線，橫軸是溫度，縱軸是熒光信號或光散射強(qiáng)度。讀圖的人只要抓住幾個關(guān)鍵點，就能判斷蛋白穩(wěn)不穩(wěn)。
一、兩種常見信號
1.熒光信號：蛋白里有色氨酸。天然折疊時色氨酸被包在內(nèi)部，熒光弱；溫度升高后蛋白展開，色氨酸暴露，熒光迅速增強(qiáng)。
2.光散射：蛋白一旦聚集，顆粒變大，光散射值突增。
二、曲線長什么樣
1.熒光曲線像一條緩慢上升的斜線，在某個溫度突然跳高，形成“S”形。
2.光散射曲線先平后陡，像折線。兩條曲線可疊加在同一張圖里。
三、關(guān)鍵溫度
1.Tm：熒光曲線中點對應(yīng)的溫度，表示一半蛋白已經(jīng)展開。Tm越高，蛋白越穩(wěn)定。
2.Tagg：光散射開始陡升的溫度，表示開始聚集。Tagg比Tm低，說明蛋白先聚后展開，不穩(wěn)定。
四、看圖步驟
1.先看Tm：在軟件里點一下中點，讀出數(shù)值。野生蛋白Tm=60℃，突變體Tm=52℃，說明突變后穩(wěn)定性下降。
2.再看Tagg：如果Tagg=55℃，Tm=60℃，兩者差8℃，蛋白在展開前已開始聚集。
3.看曲線形狀：曲線陡峭，說明協(xié)同性好，一次全部展開；坡度平緩，說明存在中間狀態(tài)，可能部分折疊。
五、注意事項
1.蛋白濃度要統(tǒng)一，常用0.1–0.5 mg/mL，濃度高會提前聚集。
2.升溫速率1℃/min常用，太快會低估Tm。
3.緩沖液pH和鹽濃度保持一致，否則對比無意義。
4.每批樣品測三次，Tm偏差在±0.5℃以內(nèi)才可信。
蛋白穩(wěn)定性分析儀的曲線圖就是一張“溫度-信號”折線圖。找到Tm和Tagg兩個數(shù)字，再比較它們的高低和距離，就能快速判斷蛋白是否穩(wěn)定、配方是否有效。
